ER-トラッカー レッド

ER-TrackerRed (小胞体レッド蛍光プローブ) は、赤色蛍光色素 BODIPY FL とグリベンクラミドの組み合わせです。化学構造中のグリベンクラミド基は、もともと II 型糖尿病治療薬であり、小胞体の ATP 感受性カリウムチャネルのスルホニル尿素受容体に結合するため、小胞体に選択的に局在し、小胞体特異的な薬剤として使用できます。細胞の小胞体を標識するための蛍光プローブ。ER トラッカー レッドは優れた特異性を持ち、生細胞の小胞体であり、ミトコンドリアをほとんど染色せず、細胞毒性が低い。このプローブは、染色および固定後も生細胞の染色特性を部分的に保持できます。

ドライアイスを入れて発送し、光の当たらない-20度で12か月間保管してください。

1. アッセイ作業溶液の調製:

1.1.この製品は 1 mM の保存溶液であり、実験前に室温に戻し、試薬がチューブの底に確実に沈むように低速で短時間遠心分離します。

1.2.小胞体検出用の緩衝液 (ハンクス、PBS など、ハンクスを推奨) または基礎培地 (血清を含まない) によって 0.25-1 μM の作業溶液に希釈されます。

2. 細胞染色(以下のプロトコールは接着細胞用です。浮遊細胞交換には遠心分離が必要です)

2.1.正常細胞または処理細胞は、バッファーで 1-2 回、毎回 3-5 分間洗浄されます。

2.2.あらかじめ温めた小胞体アッセイ作業溶液を加え、細胞培養インキュベーター内で 37 度で 20 分間インキュベートします (インキュベーション時間は、細胞の種類や状態が異なるため、ある程度調整できます)。

2.3.小胞体アッセイ作業溶液を除去し、バッファーで 2-3 回、それぞれ 3-5 分間洗浄します。

2.4.赤色蛍光 (Ex=587 nm、Em=615 nm) は、フィルムを直接ブロックした後、または抗蛍光破裂剤 (G1401 を推奨) を使用してブロックした後、蛍光顕微鏡で観察されます。

3. 細胞固定 (オプション):

注記:染色後、本製品を固定することは可能ですが、固定後は蛍光シグナルが減衰します。加工のために穴を開けることはできず、穴を開けると蛍光標識が消えてしまいます。

3.1.染色および洗浄された処理細胞を固定液 (G1101 を推奨) に加え、室温で 5 分間固定します。

3.2.固定液を除去し、バッファーで 2-3 回、毎回 3-5 分間洗浄します。

3.3.洗浄後、実験の必要に応じて細胞をブロックしたり、顕微鏡で検査したり、さらに染色したりできます。

1. 細胞の種類や状態が異なるため、色素の使用濃度やインキュベーション時間を適切に調整できます。

2. 染色後の処理のためにプローブに穴を開けることができず、穴を開けた後は細胞の蛍光がほぼ完全に消失しました。

3. グリベンクラミドの薬理学的特性は、小胞体の特定の機能に影響を与える可能性があります。一部の特殊化した細胞におけるスルホニル尿素受容体の発現の変動により、小胞体非特異的な染色が生じる可能性もあります。

4. 生細胞を染色および洗浄する場合、アッセイ作業溶液および洗浄バッファーを 37 度に予熱する必要があります。温度差刺激により細胞の形態に影響を与えないように、染色および洗浄はインキュベーター内で培養して行う。

5. 蛍光の消光を防ぐために、染色プロセス全体を光から遠ざけて操作する必要があります。

6. プローブマスターミックスは、凍結と解凍を繰り返さないように別の容器に保管する必要があります。無駄を避けるため、染色溶液は必要に応じて調製されます。

7. 健康と安全のため、操作中は白衣と手袋を着用してください。

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