製品情報
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製品名 |
猫。 いいえ. |
仕様 |
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マイコプラズマ検出キット (プローブ qPCR) |
G1903-50 |
50 受信者 |
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G1903-100 |
100 受信者 |
製品説明
この製品は、細胞培養およびその他の生物学的材料中の 8 つの一般的なマイコプラズマ汚染を検出するための Taqman プローブ法に基づいており、簡単な操作、高感度、および高特異性を特徴としています。検出可能なサンプルは、3-6 日後に行われた細胞培養からの上清です。接種; サンプルが細胞懸濁液である場合、または qPCR 阻害剤が存在する場合、反応を実行する前に DNA を抽出する必要があります。このキットには、サンプルに qPCR 阻害剤が含まれているかどうかが不明な場合に偽陰性結果を防ぐために、qPCR 反応の前にサンプルに追加できる PositiveControl も含まれています。
保管とSヒップ条件
濡れた氷を入れて発送し、光の当たらない-20度で12か月間保管してください。
製品C頻繁にt
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コンポーネント番号 |
成分 |
G1903-50 |
G1903-100 |
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G1903-1 |
2×MycoUniversal Blue qPCR マスターミックス |
500 µL |
1mL |
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G1903-2 |
Myco プライマー & プローブ ミックス |
60 µL |
120 µL |
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G1903-3 |
ポジティブコントロール |
50 µL |
100 µL |
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マニュアル |
1個 |
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実験前の準備
1. リアルタイム PCR アンプ。
2. 実験用の qPCR チューブまたはプレート。
アッセイプロトコル
1. サンプルの準備:
接着細胞: 一般的に使用される細胞培養培地を使用する場合、細胞を接種するか 3 日以上交換する場合、1 μL の培地上清を採取して qPCR 反応システムに直接添加できます。
浮遊細胞: DNA を抽出してから qPCR 反応を行う必要があります。
反応阻害剤: qPCR 阻害剤が細胞培養溶液に存在する場合、qPCR 反応を実行する前に DNA を抽出する必要があります。
2. 推奨される qPCR 反応システム:
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成分 |
20μLのrxn |
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2×MycoUniversal Blue qPCR マスターミックスa |
10 μL |
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Myco プライマー & プローブ ミックス |
1.2 μL |
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サンプラb |
1 μL |
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ヌクレアーゼフリーの水 |
20μLに加える |
ａ． ROX Reference Dye は qPCR Master Mix には含まれていません。qPCR プログラムを設定するときは、ROX チャンネルを None として選択してください。 ROX Reference Dye を追加する必要がある場合は、50X ROX Reference Dye を購入し、最終濃度 1X で使用してください。
b.サンプルに qPCR 阻害剤が含まれているかどうかが不明な場合は、サンプルの添加と同時に 0.5 µL のポジティブ コントロールを qPCR 反応システムに追加します。ネガティブコントロールが必要な場合は、サンプルをヌクレアーゼフリーの水に置き換えるか、テンプレートを使用せずに置き換えることができます。
3. qPCR反応プログラム（機種に応じて適切に調整可能）:
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A. 2 段階の方法 |
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ステージ |
ステップ |
Cサイクル |
T温度 |
時間 |
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ステージ1 |
可換性 |
1 |
95度 |
30秒 |
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ステージ2 |
変性 |
40 |
95度 |
15秒 |
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アニーリング/エクステンション |
60度 |
30秒a |
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B. 3 段階の方法 |
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ステージ |
ステップ |
Cサイクル |
T温度 |
時間 |
|
ステージ1 |
可換性 |
1 |
95度 |
30秒 |
|
ステージ2 |
変性 |
40 |
95度 |
15秒 |
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アニーリング |
55-65度 |
10秒 |
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拡大 |
72度 |
30秒a |
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増幅特異性を向上させるには、2 段階のプログラムを使用するか、アニーリング温度を上げます。
増幅効率を向上させるには、3 ステップのプログラムを使用するか、伸長時間を延長します。
4. qPCR 反応パラメーター:
レポーター蛍光部分は FAM で、消光蛍光部分は選択されていません。
注記
1. 試薬を解凍後、上下を逆にして軽く混ぜてから使用してください。泡が立たないように、回して混ぜたりしないでください。
2. 反応液を調製するときは、試薬を氷上に置いてください。
3. サンプル間のコンタミネーションを極力避けるため、反応液の調製・分注には新品のディスポーザブルチップをご使用ください。
4. 繰り返しの凍結融解を避け、解凍後は1ヶ月以内にご使用ください。
5. 健康と安全のため、操作中は白衣と手袋を着用してください。
対応機種
ABI: 5700、7000、7300、7700、7900、7900HT、7900 HT Fast、StepOne™、StepOne Plus™、7500/7500 Fast、ViiA 7™、QuantStudio™、PikoRealTM Cycler;
ストラタジーン: Mx3000P®、3005P™、4000™;
Bio-Rad: CFX96™、CFX384™、iCycle iQ™、iQ5™、MyiQ™、MiniOpticon™、Opticon®、Opticon 2、Chromo4™;
エッペンドルフ: Realplex 2s、Mastercycler® ep、realplex。
IIIumina：エコQPCR
セファイド: SmartCycle®
Qiagen Corbett: Rotor-Gene®
ロシュ: LightCycle™
タカラ サーマルサイクラーダイス
分析: qTOWER
qTOWER：ラインジーン
研究用途のみ!
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