マウスジェノタイピングキット

このキットには、マウスの尾、足の指、耳用の迅速溶解バッファーとジェノタイピング用の PCR ミックスが含まれています。溶解産物はゲノム抽出や精製を必要とせず、PCR 増幅のテンプレートとして直接使用できます。操作が簡単で、マウスへのダメージがほとんどなく、非常に効率的なジェノタイピング、ノックアウト検出、および導入遺伝子の同定を達成するために必要な組織サンプルは微量のみです。

2x マウス ジェノタイピング PCR ミックス (+ 色素) には、DNA ポリメラーゼ、dNTP の高い阻害と迅速な増幅、および直接増幅の高効率と特異性を実現する最適化されたバッファー システムが含まれています。 2Kbまでの標的遺伝子の増幅に適しています。

保管および配送条件

湿った氷を入れて発送します。マウスジェノタイピング溶解バッファー A は 4 度で保存します。残りのコンポーネントは -20 度で保管され、12 か月間有効です。

テンプレートの準備

1. 溶解溶液の準備

a:マウス ジェノタイピング ライシス バッファー A は、低温下で白い沈殿物として現れます。使用前に白い沈殿物が消えるまで37度で2-3分間インキュベートしてください。使用には影響ありません。

2. 穏やかに混合し、瞬時に遠心分離します。

3. 1-3 mm の尾端、2-3 mm の直径 (穴があいた) マウスの耳または 2-3 mm のつま先 (爪の長さを除く) を採取し、単一サンプルのライセートをサンプルに加えます。溶解するサンプルを 50 度で 10 分間インキュベートし、完全に溶解するには 95 度で 3 分間インキュベートします。

4. 溶解した組織ブロックを 12000 rpm で 1 分間チューブの底まで遠心分離し、上清を PCR 反応のテンプレートとして直接使用できます。上清は別の滅菌 EP に移し、-20 度で長期保存できます。

推奨PCR反応系（20μL）：

a:鋳型の添加量は反応系の1/10を超えないようにしてください。

b: プライマーの最終濃度は {{0}.5-1.0 μM でした。推奨されるプライマー濃度は 0.5 μM です。プライマーが少なすぎると、増幅収率が低くなるか、増幅されなくなる可能性があり、プライマーが多すぎると、非特異的増幅が発生する可能性があります。

5. 推奨される PCR 増幅条件:

1. 試薬を使用する前に、上下を逆にして軽く混ぜてください。気泡が発生するのを避けるため、旋回させたり、振動させたりしないでください。

2. 異なるサンプル間の相互汚染を避けるために、サンプルを収集した後、サンプラーを 2% 次亜塩素酸ナトリウム溶液に繰り返し洗い流します。

3. 十分な劈開ができるように、組織を細かく切ります。

4. Mouse Genotyping Lysis Buffer A および Mouse Genotyping Lysis Buffer B は、調製したまま使用し、混合後あまり長時間放置しないでください。そうしないと、溶解効果が影響を受けます。

5. 組織ブロックの溶解が難しい場合は、溶解時間を 50 度で 20 分間に延長することができます。

6. 溶解後、EP チューブ内に不完全な溶解組織が残りますが、これは正常な現象であり、使用には影響しません。

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