製品紹介

製品名	猫。いいえ。	仕様
MagBind プラスミド DNA ミニプレップキット	G3600-100T	100T

説明/紹介

MagBind Plasmid DNA Miniprep Kit は、改良されたアルカリ溶解法に基づいた独自の磁気ビーズを採用し、DNA から少量のプラスミドを安定かつ効率的かつ便利に抽出します。 大腸菌。 DNA 収量は、1-5 mL の新鮮な細菌培養物から抽出すると最大 20 μg です。

このキットで抽出されたプラスミドは、細胞トランスフェクション、DNA シーケンス、PCR、PCR ベースの突然変異誘発、インビトロ転写、細菌形質転換、エンドヌクレアーゼ消化およびその他の実験。

保管および配送条件

RNase A は湿った氷と一緒に発送し、-20 度で保管する必要があります。他の試薬は出荷され、最長 1 年間室温で保管されます。

商品内容

コンポーネント番号	成分	G3600-100T
G3600-1	解決策 I	20mL
G3600-2	解決策 II	20mL
G3600-3	中和バッファー	20mL
G3600-4	RNase A	200 μL
G3600-5	SweMag ビーズ	3.5mL
G3600-6	バインディングバッファー	20mL
G3600-7	バッファSPW	24mL
G3600-8	バッファTE	15mL
マニュアル		1部

始める前に（必ずお読みください）

1. 初めて使用する前に、キットに含まれるすべての RNase A を溶液 I に加え、よく混合し、バイアルにマークを付けます。 RNase A添加後は4℃で保存してください。

2. 低温では、溶液 II が沈殿することがあります。この場合、沈殿物を65度で再溶解し、よく混合してからご使用ください。

3. 大量の気泡が発生する可能性があるため、Solution II (Lysis Buffer) を激しく振らないでください。 COによる酸性化を防ぐため、使用後はボトルのキャップをしっかり閉めてください。₂空気中。

4. 初めて使用する前に、規定量の無水エタノールを結合バッファーとバッファー SPW に加え、よく混合し、ボトルにマークを付けます。

5. 磁気スタンド、無水エタノール、滅菌済み 1.5 mL 遠心管が必要ですが、このキットには付属していません。

アッセイプロトコル/手順

1. 一晩新鮮な細菌培養物 1-5 mL を 12,000 rpm で 1 分間遠心分離し、上清を廃棄します。

2. ボルテックスまたは上下にピペッティングすることにより、細菌ペレットを 150 µL の溶液 I (使用前に RNase A が添加されていることを確認してください) に十分に再懸濁します。

3. 150 μL の溶液 II を加え、チューブを8-10回反転させて穏やかに混合し、完全な溶菌を確実にします。

注 1: ゲノム DNA の破損や抽出したプラスミドの汚染を避けるため、激しく振盪しないで、穏やかによく混合してください。

注 2:8-10 回反転した後は、ミックスがクリアになる必要があります。また、合計溶解時間は 5 分を超えてはなりません。

4. 予冷した中和バッファー 150 µL を加え、遠心管を 8-10 回静かに反転してすぐによく混合します (少量の小さな白い沈殿が現れます)。室温、12000 rpm で 10 分間遠心分離します。

5. 上清を新しい 1.5 mL 遠心管に注意深く移し、450 μL の結合バッファーを加えて上下に混合します。次に、30 μL の SweMag ビーズ懸濁液を加え (SweMag ビーズは使用前に十分に再懸濁し、均一に分散させる必要があります)、磁性ビーズが均一に分散するまで数回穏やかに上下反転させます。

6. 室温で 5 分間放置します。インキュベーション中にピペットまたはボルテックスミキサーで 2-3 回混合し、磁性ビーズを均一に分散させます。

7. チューブを磁気スタンドに置き、磁気ビーズが完全に付着するまで 30 秒間放置します。遠心分離管を備えた磁気スタンドを数回ゆっくりと上下に反転させ、残留磁気ビーズを洗い流します。透明な上清を吸引して廃棄します（回収率の低下を避けるため、磁気ビーズは吸引しないでください）。

８．３００μＬの緩衝液ＳＰＷを添加し、ペレット状磁性ビーズを含むチューブを磁性スタンドから取り出し、ピペッティングで静かに上下させて磁性ビーズを再懸濁する。チューブを磁気スタンドに置き、30 秒間放置します。遠心分離チューブを備えた磁気スタンドを数回静かに上下させて、残留磁気ビーズと塩を洗い流します。透明な上清を吸引して廃棄します (回収率の低下を避けるため、磁気ビーズは吸引しないでください)。

9. ステップ 8 を繰り返します。

10. 遠心分離管の蓋を開け、65 度で 3-5 分間放置するか、室温で 5-10 分間放置して、残留エタノールおよびその他の液体を完全に蒸発させます。 (乾燥すると機能しなくなりますので、乾燥させないでください。)

11. 磁気スタンドを取り外し、50 ～ 80 μL の Buffer TE またはヌクレアーゼフリー水を加え、ピペットで静かに上下させて磁気ビーズを再懸濁し、室温で 3 分間放置します。

12. 磁気ビーズが完全に付着するまでチューブを磁気スタンドに置き、上清を新しい遠心チューブに吸引します。上清には精製されたプラスミドが含まれています。