イフ750-チラミド

チラミドシグナル増幅 (TSA) は、HRP を使用して標的抗原の高密度 in situ 標識を実行する酵素検出法の一種で、IF/IHC のシグナル増幅に適用できます。 TSA テクノロジーの主な原理: 過酸化水素 H2O2 の存在下では、ホースラディッシュ ペルオキシダーゼ HRP は、非常に活性の高い短命な中間体としてチラミンを触媒できます。短期間のうちに、中間体は周囲のタンパク質の電子が豊富な表面に共有結合してチラミン複合体を形成し、「島」のような多数の豊富なクラスターが酵素を中心に統合されます。抗原抗体結合部位に大量のルシフェリンが沈着し、シグナル増幅が達成されました。

TSA 技術を使用すると、従来の方法では検出できない低存在量のターゲットを検出できます。チラミンに基づくシグナル増幅技術は、非常に高い感度を提供し、微量の標的抗原を検出できます。 TSA テクノロジーは、抗体の量を大幅に削減して抗体を節約し、従来の染色法と組み合わせてマルチカラーイメージングに使用したり、2 つ以上のチラミン反応を連続して実行してサンプル上の異なるターゲットを標識したりできるため、複数の蛍光染色を行うことができます。異なる蛍光チラミンを繰り返し標識することで実現可能

保管および取り扱い条件

輸送用の湿ったアイスパック。-20 度で 12 か月間保管します。

注記：

1. チューブを室温で溶かした後、使用前に短時間遠心分離します。

2. 蛍光二次抗体と比較して、TSA キットは感度が高く、シグナルが強いです。したがって、一次抗体の濃度を下げる必要があり、非特異的結合によって引き起こされるバックグラウンド蛍光を減らすために、抗体マニュアルで推奨されている希釈率に基づいて一般に 5-10 倍に拡大します。最良の結果を得るには、抵抗勾配濃度を設定することをお勧めします。

3. バックグラウンド蛍光が強い場合は、組織の自己蛍光の消光ステップを増やすことをお勧めします。

4. 蛍光チラミドの推奨希釈率は 1:500 ですが、実験結果に応じて希釈率を調整できます (推奨希釈率範囲は 1:200-1:1000)。

5. 希釈液は、0.003% H2O2 を含む 1×TBST (G0004 推奨) を自分で準備する必要があります。 1×TBST (G0004 推奨) 100 mL、3% H2O2 100 μL を加え、よく混合します。希釈液は失敗しやすいので今のうちに使うのがおすすめです。

6. 複数の蛍光標識を行う場合は、最初にポリクローナル抗体をインキュベートし、次にモノクローナル抗体をインキュベートすることをお勧めします。高存在量の標的タンパク質に対応する抗体が最初にインキュベートされ、次に低存在量の標的タンパク質に対応する抗体がインキュベートされます。具体的な操作手順については、TSAPLus 蛍光マルチラベル (1-7 ラベル、2-8 色蛍光) 染色キット (G1226、G1236、G1255、G1256、G1257、G1259) を参照してください。

7. 操作中は白衣と使い捨て手袋を着用してください。

8. 蛍光イメージングシステムの光源マップに従って、TSA 蛍光マルチラベリングを実行するためにさまざまな蛍光色素の組み合わせを選択できます。

研究用途のみ!