Dual-Lumi デュアルルシフェラーゼ レポーター遺伝子アッセイ キット

 

製品名	猫。いいえ。	仕様
Dual-Lumi デュアルルシフェラーゼ レポーター遺伝子アッセイ キット	G1701-100T	100T

 

 

ルシフェラーゼシステムは主にレポーター遺伝子の検出に使用されます。標的遺伝子の転写調節要素をルシフェラーゼの上流と下流にクローニングしてレポーター遺伝子プラスミドを構築します。次に、トランスフェクトされた細胞を薬物または他の刺激で処理し、その後細胞を収集して溶解し、溶解物中のルシフェラーゼ活性を測定します。標的遺伝子に対する薬物などの外因性刺激の転写調節効果は、次のように決定されます。

ルシフェラーゼ活性。デュアル蛍光システムでは、2種類の蛍光を互いに干渉することなく導入・検出し、1つは検出蛍光として、もう1つは内部参照蛍光として使用し、細胞数やトランスフェクションの違いを排除します。効率。

この Dual-Lumi デュアル ルシフェラーゼ (ホタル&ラニラ ルシフェラーゼ) レポーター ジーン アッセイ キットは、最初にホタル ルシフェリンを基質として使用してホタル ルシフェラーゼ活性を検出し、次にホタルの蛍光を消光しながらセレンテラジンを基質として使用してラニラ ルシフェラーゼ活性を検出するように設計されています。このキットは、迅速な検出、高感度、広い検出範囲を特徴とし、2 種類の蛍光検出が互いに干渉しません。

 

 

ドライアイスを入れて発送します。光の当たらない-80度で12か月間保管してください。 -20 度光を避けて保管し、6 か月以内に使用することをお勧めします。

 

 

コンポーネント番号	成分	G1701-100T
G1701-1	細胞溶解バッファー	50mL
G1701-2	ホタルルシフェラーゼ反応基質 (50×)	200 μL
G1701-3	ホタルルシフェラーゼ反応バッファー	10mL
G1701-4	ラニラルシフェラーゼ反応基質 (50×)	200 μL
G1701-5	ラニラルシフェラーゼ反応バッファー	10mL
マニュアル		1個

 

 

1. 1× ホタルルシフェラーゼ反応作業溶液を準備します。

1.1.キットを分離して室温で解凍し、成分が完全に溶解するように上下を逆にして混合します。ホタル ルシフェラーゼ反応基質 (50 倍) およびラニラ ルシフェラーゼ反応基質 (50 倍) は、氷上で解凍し、試薬がチューブの底に確実に沈むように短時間遠心分離する必要があります。

1.2.ホタルルシフェラーゼ反応基質（50×）をホタルルシフェラーゼ反応緩衝液で50倍に希釈します。すなわち、10μLのホタルルシフェラーゼ反応基質（50×）と490μLのホタルルシフェラーゼ反応緩衝液をよく混合し、500μLの1×ホタルを取得します。予備用のルシフェラーゼ反応作業溶液。

1.3.ラニラ ルシフェラーゼ反応基質 (50 倍) をラニラ ルシフェラーゼ反応バッファーで 50- 倍に希釈します。つまり、10 μL のラニラ ルシフェラーゼ反応基質 (50 倍) を 490 μL のラニラ ルシフェラーゼ反応バッファーと混合して 500 μL を取得します。 1×海腎臓ルシフェラーゼ反応作業溶液。ラニラ・ルシフェラーゼ反応緩衝液をよく混合して、500μLの1×ラニラ・ルシフェラーゼ反応基質(50×)を得た。

注意：無駄を避けるため、用量に従って調製してください。ルシフェラーゼ反応作業溶液はすぐに使用し、凍結と融解を繰り返さないように、1 か月以内に使用できるよう -20 度で保存することをお勧めします。

2. 細胞の前処理と溶解:

2.1.細胞は対応するプレートに移植され、実験のニーズに応じてトランスフェクトまたはその他の関連する前処理が行われます。

2.2.接着細胞の場合: 元の細胞培養培地を除去した後、以下の表に従って対応する量の細胞溶解バッファーを加えて細胞を覆います。懸濁細胞の場合、細胞を遠心分離管に移し、遠心分離して培地を除去し、細胞溶解バッファーを加えます。以下の表に従って、細胞を再懸濁するための対応する量の細胞溶解バッファー。

 

細胞培養プレート	細胞溶解バッファー/ウェル
6-そうですね	500 μL
12-そうですね	300 μL
24-そうですね	200 μL
48-そうですね	150 μL
96-そうですね	100 μL

 

2.3.室温で 10-20 分間十分に溶解した後、細胞をこすり取って 1.5 mL 遠心管に集め、4 度、12000 g で 10 分間遠心分離し、上清 (細胞溶解物) を予備用に保存します。

3. 蛍光検出:

3.1.あらかじめ調製した 1× ホタルルシフェラーゼ反応作業溶液と 1× ラニラルシフェラーゼ反応作業溶液を室温に平衡化します。

3.2. 1×ホタルルシフェラーゼ反応作業溶液を100μL/ウェルで不透明な白色96-ウェルプレートに添加します。

3.3.ステップ 2 の細胞溶解上清を上記の 96- ウェル プレートに 20 μL/ウェルで添加します。

3.4.水平振動は均一であるため、できるだけ早くルミノメーター、化学発光検出モジュールを備えた多機能酵素マーカー、または生物発光、化学発光検出--を検出できる機器を使用して、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子活性（蛍光強度）を検出します。

3.5. 1×Ranilla Luciferase Reaction Work Solutionを100μL/ウェルで、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子活性が上記のように検出されたウェルに添加します。

3.6.水平振動は均一であるため、できるだけ早くルミノメーター、化学発光検出モジュールを備えた多機能酵素マーカー、または生物発光、化学発光検出--を検出できるラニラルシフェラーゼレポーター遺伝子活性（蛍光強度）を検出できる機器を使用してください。

 

 

1. 検出前に、1× Firefly Luciferase Reaction 作業溶液を室温に戻してから使用する必要があります。

2. ルシフェラーゼ反応バッファーは解凍後に多少の沈殿物が生じますが、これは正常な現象です。完全に溶解していることを確認するために、使用前によく振ってください。

3. 1×ルシフェラーゼ反応溶液は酸化しやすいため、複数サンプル検出を行う場合、1×ルシフェラーゼ反応溶液の添加は可能な限り短時間で制御する必要があります。マルチチャンネルピペットの使用をお勧めします。サンプルを添加する際は、ピペットの各ウェルの吸引量が一定であるかどうかに注意してください。

4. ウェル間の干渉を防ぐため、不透明な白色のウェルプレートの使用を推奨します。

5. 健康と安全のため、操作中は白衣と手袋を着用してください。

 

研究用途のみ!

 

 

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